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細胞培養瓶的使用注意事項
發布時間:2023-06-05 09:14:09

細胞培養瓶是實驗室進行長時間細胞培養、大量細胞擴增和防污染的最適培養器皿。細胞培養瓶可方便、安全地處理細胞,確保實驗流程安全進行。

什么是細胞培養瓶

細胞培養瓶是實驗室進行長時間細胞培養、大量細胞擴增和防污染的最適培養器皿。細胞培養瓶可方便、安全地處理細胞,確保實驗流程安全進行。

細胞培養瓶的材質

細胞培養瓶的材質可分為玻璃的和塑料(聚丙乙烯),玻璃的瓶子表面是親水的,細胞貼壁效果好,而塑料材質的瓶子需要經過表面的改性處理后才能支持細胞貼壁培養。

細胞培養瓶的貼壁效果

細胞培養瓶的貼壁效果可分為表面改性處理和未表面處理,聚苯乙烯(PS)表面是憎水的,一次性細胞培養皿等標明Tissue culture treated是表示該器皿經過表面的改性處理,適合貼壁細胞的培養。

細胞培養瓶的蓋子種類

細胞培養瓶的蓋子可分為密閉蓋、聚酯蓋、透氣蓋(強烈推薦)、隔墊蓋等。

細胞培養瓶的瓶頸種類

細胞培養瓶的瓶頸也有多種樣式,有直頸、斜頸、角度頸、三角形、矩形。

細胞培養瓶底部分類

細胞培養瓶的底部可分為正方形、長方形、三角形等,根據細胞貼壁面積又可以分為25~175cm2多種。

細胞培養瓶的使用注意事項

(1)關于蓋子

一次性細胞培養瓶的蓋子不要擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH 7.2-7.4范圍內具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時對一些細胞可能有毒。

HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養條件下,一次性細胞培養瓶的蓋子應擰緊,以防止培養液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數培養液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養液呈橙黃色,堿性培養液呈深紅色。

(2)降低“生長空洞”

多數用戶使用的不是的預包被一次性細胞培養瓶,而是普通的一次性細胞培養瓶,其表面環境并不利于無血清培養環境下的間充質干細胞貼壁。37℃放置5-10分鐘,可讓培養基中的促貼壁物質更好地與一次性細胞培養瓶底部結合,使得間充質干細胞的貼壁能力增強,降低“生長空洞”出現的概率。

(3)細胞消化

將瓶子豎立放置,吸走培養基,如果培養基中的脫落細胞較多,說明細胞現在很容易脫落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),來回輕微晃動培養瓶直到細胞完全脫落,加入10mlMEM,混勻,不能吹打,分裝2瓶。

如果細胞沒長滿就脫落,則只需加入5mlMEM,不分裝。

如果瓶中的細胞貼壁較牢固,培養基上清沒有細胞脫落碎片,且細胞長滿達到80%以上,吸走培養基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速輕微晃動,豎立培養瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超過3min,細胞完全消化脫壁,取出加入10ml培養基輕微吸打混勻,分裝2瓶。

細胞對于生長環境非常敏感,細胞培養瓶作為一種較為常用的耗材,在操作時更要謹慎,嚴格按照規定流程進行,避免因操作不當影響細胞生長。

應用場景

一般在實驗室使用較多。


(文章來源于互聯網)

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